Checklite 250 PlusKit för mikrobiella biomassaanalyser och hygienövervakning för 250 bestämningar

CheckLite 250 Plus är ett kit för mikrobiell biomassaanalys och hygienövervakning baserat på ATP-mätmetoden. Den kan detektera mängden ATP som är lika med över 10 000 celler av E. coli/ml.

Den innehåller termostabilt firefly luciferas. Bioluminescensreagenset innehåller firefly luciferin och luciferas. Detta luciferasenzym katalyserar reaktionen där luminescens observeras på grund av ATP och luciferins interaktion. Mängden bioluminiscens som produceras i reaktionen är direkt proportionell mot mängden ATP i provet

1 x 250 bestämningar

Testvaraktighet: 20-40 minuter inklusive kalibreringskurva

Förvaring: 2 – 8 °C, får INTE FRYSAS

Satsens innehåll:

Luciferin-Luciferas-reagens – 5 injektionsflaskor med frystorkat pulver

Beredningsbuffert – 5 injektionsflaskor (5,5 ml)

ATP-reagens – 5 injektionsflaskor (5,5 ml)

Beredning av bioluminiscensreagens

Luciferin-Luciferas-reagenset förvaras under vakuum i flaskor märkta med gröna etiketter.

Häll rekonstitutionsbufferten från den rosa-märkta injektionsflaskan i den öppnade grön-märkta injektionsflaskan och låt den stå i rumstemperatur i några minuter (ett svagt sediment kan bildas i rekonstitutionsbufferten under förvaring. Detta påverkar inte testresultaten).

Rör försiktigt om injektionsflaskan tills innehållet är helt upplöst. Undvik skumbildning.

Rör inte flaskans kant eller toppen av gummiproppen direkt med händerna, eftersom detta ibland kan öka reagensets basvärde.

En injektionsflaska med Luciferin-Luciferas-reagens kan användas för mer än 50 analyser under normala förhållanden.

Hantering av prover

ATP-koncentrationen i levande celler förändras snabbt. Extrahera därför ATP från cellerna eller frys cellerna omedelbart efter provtagning. Även vid extraktion kan det vara nödvändigt att hämma eller förstöra ATP-nedbrytande enzymer för att förhindra att enzymer minskar ATP-koncentrationen.

Förbehandling av prover

Fasta prover:

Behandla provet med en stomacher eller en homogenisator och använd supernatanten för efterföljande mätning.

Vätskeprover:

Om provlösningen är grumlig eller färgad, eller innehåller hämmande joner såsom Cl-, späd provet efter behov.

Mätning

Häll 100 µl av provet, behandlat enligt beskrivningen ovan, i ett provrör för mätning och tillsätt 100 µl av den ATP-frisättande reagenslösningen i provröret.

Låt provröret stå i rumstemperatur i 10-60 sekunder för att extrahera ATP från cellerna. Den tid som krävs för extraktion varierar beroende på typen av mikroorganismer. Till exempel tar det 10-20 sekunder att extrahera ATP från bakterieceller och 60 sekunder för jästceller.

Omedelbart efter extraktion, tillsätt 100 µl av Luciferin-Luciferase-reagenslösningen och mät mängden bioluminescens med en luminometer som Lumitester C-110 (ID-nr 1 002 647).

För att skapa en kalibreringskurva, mät mängden bioluminescens av stegvisa spädningar av ATP-standardlösningen med den metod som beskrivs ovan.

Antalet mikrobiella celler (kolonibildande enheter, CFU) kan bestämmas baserat på korrelationen mellan mängden ATP och antalet CFU, som tidigare räknades med den konventionella koloniräkningsmetoden.