Checklite 250 Plus Kit pour l’analyse de la biomasse microbienne et le suivi de l’hygiène pour 250 déterminations

CheckLite 250 Plus est un kit pour l’analyse de la biomasse microbienne et le suivi de l’hygiène, basé sur la méthode de mesure de l’ATP. Il peut détecter la quantité d’ATP correspondant à plus de 10 000 cellules d’E. coli/ml.

Il contient de la luciférase de luciole thermostable. Le réactif de bioluminescence contient de la luciférine de luciole et de la luciférase. Cette enzyme luciférase catalyse la réaction au cours de laquelle la luminescence est observée en raison de l’interaction entre l’ATP et la luciférine. La quantité de bioluminescence produite dans la réaction est directement proportionnelle à la quantité d’ATP dans l’échantillon.

1 x 250 déterminations

Durée du test : 20 à 40 minutes, y compris la courbe d’étalonnage

Conservation : 2 – 8 °C, NE PAS CONGELER

Contenu du kit :

Réactif Luciférine-Luciférase – 5 flacons avec poudre lyophilisée

Buffer de reconstitution – 5 flacons (5,5 ml)

Réactif ATP – 5 flacons (5,5 ml)

Préparation du réactif de bioluminescence

Le réactif Luciférine-Luciférase est conservé sous vide dans des flacons marqués d’étiquettes vertes.

Versez le buffer de reconstitution depuis le flacon marqué de rose dans le flacon vert ouvert et laissez-le reposer à température ambiante pendant quelques minutes (un léger sédiment peut se former dans le buffer de reconstitution lors du stockage. Cela n’affecte pas les résultats du test).

Agitez doucement le flacon jusqu’à ce que le contenu soit complètement dissous. Évitez la formation de mousse.

Ne touchez pas le bord du flacon ou le sommet du bouchon en caoutchouc directement avec les mains, car cela peut parfois augmenter la valeur de base du réactif.

Un flacon de réactif Luciférine-Luciférase peut être utilisé pour plus de 50 analyses dans des conditions normales.

Manipulation des échantillons

La concentration d’ATP dans les cellules vivantes change rapidement. Extrayez donc l’ATP des cellules ou congelez les cellules immédiatement après le prélèvement. Même lors de l’extraction, il peut être nécessaire d’inhiber ou de détruire les enzymes dégradant l’ATP pour empêcher les enzymes de diminuer la concentration d’ATP.

Prétraitement des échantillons

Échantillons solides :

Traitez l’échantillon avec un stomacher ou un homogénéisateur et utilisez le surnageant pour la mesure ultérieure.

Échantillons liquides :

Si la solution d’échantillon est trouble ou colorée, ou contient des ions inhibiteurs tels que Cl-, diluez l’échantillon si nécessaire.

Mesure

Versez 100 µl de l’échantillon, traité conformément à la description ci-dessus, dans un tube à essai de mesure et ajoutez 100 µl de la solution réactive libérant l’ATP dans le tube à essai.

Laissez le tube à essai à température ambiante pendant 10 à 60 secondes afin d’extraire l’ATP des cellules. Le temps requis pour l’extraction varie selon le type de micro-organismes. Par exemple, il faut 10 à 20 secondes pour extraire l’ATP des cellules bactériennes et 60 secondes pour les cellules de levure.

Immédiatement après l’extraction, ajoutez 100 µl de la solution réactive luciférine-luciférase et mesurez la quantité de bioluminescence à l’aide d’un luminomètre tel que le Lumitester C-110 (n° d’identification 1 002 647).

Pour établir une courbe d’étalonnage, mesurez la quantité de bioluminescence de dilutions progressives de la solution standard d’ATP en utilisant la méthode décrite ci-dessus.

Le nombre de cellules microbiennes (unités formant colonie, UFC) peut être déterminé sur la base de la corrélation entre la quantité d’ATP et le nombre d’UFC, précédemment compté par la méthode conventionnelle de comptage des colonies.